KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS

BAB I

PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Berbagai metode kromatografi memberikan cara pemisahan paling kuat di laboratorium kimia. Gagasan dasarnya sederhana untuk dipahami, caranya beragam, mulai dari cara sederhana sampai yang agak rumit dari segi kerja dan peralatan, dan metode ini dipakai untuk setiap jenis senyawa. Metode ini pemanfaatannya secara luas untuk pemisahan analitik dan preparatif.

Kromatografi lapis tipis adalah suatu teknik pemisahan cara lama, digunakan secara luas, terutama dalam analisis campuran yang rumit dari sumber alam. Kromatografi lapis tipis lebih unggul bila sejumlah kondisi pemisahan yang berbeda-beda diperlukan untuk menangani penetapan kadar seluruh cuplikan, karena sejumlah bejana pengembang yang berisi berbagai sistem pelarut dapat lebih hemat dipakai. Keuntungan lain, tiadanya gangguan pelarut pada penyelidikan secara fotometri karena pelarut sebagai fase gerak telah diuapkan.

Pemisahan secara kromatografi dilakukan dengan cara mengotak-atik langsung beberapa sifat fisika umum dari molekul, pada sistem kromatografi, campuran yang akan dipisahkan ditempatkan dalam keadaan sedemikian rupa sehingga komponen-komponennya harus menunjukkan dua dari ketiga sifat tersebut yaitu kelarutan, adsorbsi, dan keatsirian.

I.2 Maksud dan Tujuan

I.2.1 Maksud Percobaan

Untuk mengetahui dan memahami cara-cara pemisahan dan identifikasi kation dan anion dengan menggunakan kromatografi lapis tipis.

I.2.2 Tujuan Percobaan

Memisahkan dan mengidentifikasi kation dan anion yang terdapat dalam suatu sampel dengan metode KLT.

I.3 Prinsip Percobaan

Penentuan jenis kation dan anion yang terkandung dalam suatu sampel dengan metode KLT berdasarkan kecepatan partisi dan adsorbsi dari zat uji ke dalam eluen dengan parameter nilai Rf dari noda yang terbentuk.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

II.1 Teori Umum

Kromatografi lapis tipis adalah metode kromatografi cair yang paling sederhana. Pada Kromatografi lapis tipis dan kromatografi kertas serupa dalam hal fase diamnya berupa lapisan tipis dan fase geraknya mengalir karena kerja kapiler. Perbedaannya dalam sifat dan fungsi fase diam. Pada KLT, fase cair lapisan tipis (tebal 0,1-2 mm) yang terdiri dari bahan padat yang dilapiskan kepada permukaan penyangga datar yang biasanya terbuat dari kaca, tapi dapat pula terbuat dari pelat polimer atau logam. Lapisan melekat kepada permukaan dengan bantuan bahan pengikat, biasanya CaSO₄ atau amilum (pati) (1).

Pada KLT, zat penyerap merupakan lapisan tipis serbuk halus yang dilapiskan pada lempeng kaca, plastik atau logam secara merata, umumnya digunakan lempeng kaca. Lempeng yang umumnya dapat dianggap sebagai kolom kromatografi terbuka dan pemisahan yang tercapai dapat didasarkan pada adsorbsi, partisi atau kombinasi kedua efek, tergantung dari jenis zat penyangga, cara pembuatan dan jenis pelarut yang digunakan (2).

KLT dengan lapis tipis penukar ion dapat digunakan untuk pemisahan senyawa polar. Perkiraan identifikasi diperoleh dengan pengamatan bercak dengan harga Rf yang identik dan ukuran hampir sama, dengan menotolkan zat uji dan baku pembanding pada lempeng yang sama. Perbandingan visual ukuran bercak yang dapat digunakan untuk memperkirakan kadar secara semikuantitatif (2).

Titik tempat campuran ditotolkan pada ujung pelat atau lembaran disebut titik awal dengan cara menempatkan cuplikan itu disana disebut penotolan. Garis depan pelarut adalah bagian atas fase gerak atau pelarut ketika ia bergerak melalui lapisan, dan setelah pengembangan selesai , merupakan tinggi maksimum yang diperoleh pelarut. Perilaku senyawa tertentu di dalam sistem kromatografi tertentu dinyatakan dengan harga Rf. Angka ini diperoleh dengan membagi jarak yang ditempuh oleh bercak linarut dengan jarak yang ditempuh oleh garis depan pelarut. Keduanya diukur dari titk awal dan harga Rf beragam mulai dari 0 sampai 1 (1).

Ada dua metode kuantitasi analit dalam KLT (cocok untuk bahan anti radioaktif). Pertama melibatkan sejumlah cara pengukuran langsung pada lempeng seperti pengukuran luas, perbandingan keterlihatan, atau densitometri. Kedua melibatkan pergerakan analit dari lempeng, diikuti dengan tahap kuantitasi. Masing-masing metode mempunyai keuntungan dan kerugian dan mempunyai kedudukan tersendiri dalam KLT kuantitatif. Teknik ini terutama ditekankan pada densitometri (3).

II.2 Uraian Bahan

1. Asam asetat (4 ; 41)

Nama resmi : Acidum aceticum

Sinonim : Asam cuka

RM / BM : CH₃COOH / 60,05

Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna, bau menusuk, rasa asam tajam.

Kelarutan : Dapat bercampur dengan air, dengan etanol 95 % Pdan dengan gliserol P.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat

Khasiat : Zat tambahan

Kegunaan : Pereaksi

2. Benzen (4 ; 658)

Nama resmi : Benzen

Sinonim : Benzena

RM / BM : C₆H₆ / 78,11

Pemerian : Cairan tidak berwarna, transparan, mudah terbakar.

Kelarutan : Larut dalam air

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Khasiat : Zat tambahan

Kegunaan : Pereaksi/eluen

3. Kloroform (4 ; 151)

Nama resmi : Chloroform

Sinonim : Kloroform

RM / BM : CHCl₃ / 119,38

Pemerian : Cairan mudah menguap, tidak berwarna, bau khas,rasa manis dan 
                   membakar.

Kelarutan : Larut dalam lebih kurang 200 bagian air, mudah larut

dalam etanol mutlak P, dalam eter P, dalam sebagian

besar pelarut organik, dalam minyak atsiri dan dalam

minyak lemak.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik, bersumbat kaca, terlindung

dari cahaya.

Khasiat : Anestetik umum, pengawet, zat tambahan

Kegunaan : Reagensia/eluen

4. Karbon tetraklorida (4 : 695)

Nama resmi : Karbon tetraklorida

RM / BM : CCl₄ / 153,82

Pemerian : Cairan jernih mudah menguap, tidak berwarna, baukhas.

Kelarutan : Sangat sukar larut dalam air, dapat bercampur dengan

etanol mutlak dan dengan eter.

Penyimpanan : Dalam wadah bersumbat kaca.

Khasiat : Sebagai obat bius

Kegunaan : Reagensia/eluen

5. Asam nitrat (4 : 650)

Nama resmi : Acidum nitricum

Sinonim : Asam nitrat

RM / BM : HNO₃ / 63,01

Pemerian : Cairan berasap, sangat korosif, bau khas sangat merangsang.

Kelarutan : Larut dalam air.

Khasiat : Zat tambahan

Kegunaan : Pereaksi

6. Dithizone (4 : 671)

Nama resmi : Difenilkarbazon

Sinonim : Difeniltiokarbazon

RM / BM : C₆H₅N=NCSNHNH₅H₆ / 256,32

Pemerian : Serbuk halus, kristal hitam.

Kelarutan : Larut dalam etanol

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup, bersuhu sejuk.

Khasiat : Pereaksi spesifik

Kegunaan : Pereaksi

7. Parasetamol (4 : 37)

Nama resmi : Acetominophenum

Sinonim : Acetominofan, Parasetamol

RM / BM : C₈H₉NO₂ / 151,16

Pemerian : Hablur atau serbuk hablur putih; tidak berbau; rasa pahit

Kelarutan : Larut dalam 70 bagian air, dalam 7 bagian etanol

(95%)p, dalam 13 bagian aceton p, dan dalam 40 bagian gliserol p

Penyimpanan : dalam wadah tertutup baik, berlindung dari cahaya

Kegunaan : sebagai sampel

8. Asetosal (4 : 43)

Nama resmi : Acidum acetylsalicylicum

Sinonim : Asetosal, Asam asetil salisilat

RM / BM : C₉H₈O₄ / 180,16

Pemerian : Hablur tidak berwarna atau serbuk hablur putih; tidak

berbau atau hamper tidak berbau; rasa asam

Kelarutan : Agak sukar larut dalam air, mudah larut dalam etanol (95%) p; larut dalam kloroform p dan dalam eter p

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : sebagai sampel

9. Asam salisilat (4 : 56)

Nama resmi : Acidum salycylicum

Sinonim : Asam salisilat

RM / BM : C₇H₆O₃ / 138,12

Pemerian : Hablur ringan tidak berwarna atau serbuk berwarna putih; hamper tidak berbau; rasa agak manis dan tajam

Kelarutan : Larut dalam 550 bagian air dan dalam 4 bagian etanol (95%) p; mudah larut dalam kloroform p dan dalam eter p; larut dalam larutan ammonium asetat p,dinatrium hidrogenfosfat p, kalium sitrat p dan natriumsitrat p

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Khasiat : Keratolitikum, anti fungi

Kegunaan : Sebagai sampel

10. Antalgin (4 : 369)

Nama resmi : Metampyronum

Sinonim : Metampiron, Antalgin

RM / BM : C₁₃H₁₆N₃N₄O₄S.H₂O / 357,37

Pemerian : Serbuk hablur putih atau putih kekuningan

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

     Kegunaan : Sebagai sampel

11. Sulfadiazin (4 : 579)

Nama resmi : Sulfadiazinum

Sinonim : Sulfadiazin

RM / BM : C1₀H₁₀N₄O₂S / 250,27

Pemerian : Serbuk putih, putih kekuningan atau putih agak merah jambu; hampir tidak berbau, tidak lama

Kelarutan : Praktis tidak larut dalam air; agak sukar larut dalam etanol (95%) p dan aseton p

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik terlindung dari cahaya

Kegunaan : Sebagai sampel

12. Kafein (4 : 125)

Nama resmi : Coffein

Sinonim : Kafein

RM / BM : C₆H₁₀N₄O₂ / 197,19

Pemerian : Serbuk atau hablur bentuk jarum, mengkilat, biasanya menggumpal putih; tidak berbau; rasa pahit

Kelarutan : Agak sukar larut dalam air dan dalam etanol (95%) p;mudah larut dalam kloroform p; dan sukar larut dalam eter p

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : Sebagai sampel

II.3 Prosedur Kerja

Buatlah eluen benzena-CCl₄ dan benzena-kloroform dengan perbandingan 10:1. Buatlah sampel 0,1 % sebanyak 10 ml dengan air suling. Siapkan chamber dan jenuhkan dengan eluen yang akan digunakan. Tambahkan beberapa tetes asam asetat sampai pH 5 dengan menggunakan kertas pH universal. Buatlah 10 ml larutan ditizon 0,1 % dalam kloroform. Masukkan sampel dengan corong pisah, kemudian masukkan juga larutan ditizon 0,1 %. Kocok dengan sekali-kali tutupnya dibuka. Kemudian diamkan beberapa saat agar terpisah dengan baik. Pisahkan larutan, kemudian yang berada di bagian bawah masukkan lagi ke dalam corong pisah. Masukkan 10 ml HNO₃ 0,02 N dalam corong pisah, lalu kocok dengan sekali-sekali tutupnya dibuka, kemudian diamkan dan pisahkan. Tampung larutan bagian bawah dalam botol vial dan totolkan pada lempeng kemudian elusi. Catat spot yang terbentuk dan hitung nilai Rf yang terbentuk.

BAB III

METODE KERJA

III.1 Alat dan Bahan

III.1.1 Alat-alat yang digunakan

Alat-alat yang digunakan dalam percobaan ini adalah Botol eluen, Corong pisah, Gelas chamber dan penutupnya, Gelas phiala, Gelas ukur 10 ml, Lempeng kromatografi (silika gel), Penotol, Pinset, Vial

III.1.2 Bahan-bahan yang digunakan

Bahan-bahan yang digunakan dalam percobaan ini adalah Air suling, Eluen Benzena-CCl₄ 10:1, Etanol 95 % , Kertas saring, Kertas pH, Larutan asam nitrat 0,02 N, Larutan Dithizon 0,1 % dalam kloroform

III.2 Cara Kerja

1. Dibuat eluen benzena-CCl4 dengan perbandingan 10:1
2. Disiapkan chamber dan dijenuhkan dengan eluen benzena-CCl₄
3. Dibuat sampel 0,1 % sebanyak 10 ml dengan air suling
4. Diukur pH larutan sampel dengan kertas pH
5. Dimasukkan ke dalam corong pisah sampel dan larutan ditizon 0,1 % dalam kloroform sebanyak 10 ml. Dikocok dengan sekali-kali tutupnya dibuka. Lalu larutan didiamkan beberapa saat agar terpisah dengan baik.
6. Larutan dipisahkan.
7. Larutan yang berada dibawah dimasukkan lagi ke dalam corong pisah
8. Dimasukkan ke dalam corong pisah 10 ml HNO₃ 0,02 N dalam corong pisah, lalu dikocok dengan sekali-sekali tutupnya dibuka, kemudian didiamkan dan dipisahkan.
9. Ditampung larutan di bagian bawah dalam botol vial dan ditotolkan pada lempeng kemudian dielusi.
10. Dicatat spot yang terbentuk dan dihitung nilai Rf yang terbentuk.

BAB IV

HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil pengamatan

IV.1.1 Data Pengamatan

No.	Jumlah noda	Kode zat	Warna noda	Jarak noda	Jarak eluen
1. 2. 3. 4. 5.	1 2 2 2 3	I X Y S R	Merah muda Coklat Coklat muda Merah muda Coklat Ungu Merah muda Orange Coklat Merah muda	3,2 0,9 4,8 3,2 4,0 4,6 3,8 4,8 4,5 3,7	5,5 5,5 5,5 5,5 5,5 5,5 5,5 5,5 5,5 5,5

IV.1.2 Perhitungan

                    Jarak yang ditempuh oleh noda

Rf =
         Jarak yang ditempuh oleh eluen

Kode sampel I
Rf = 3,2 / 5,5
Rf = 0,581 (noda merah muda)

Kode sampel X
Rf = 0,9 / 5,5
Rf = 0,163 (coklat)

Rf =4,8 / 5,5
Rf = 0,872 (coklat muda)

 Kode sampel Y

Rf = 3,2 / 5,5
Rf = 0,581 (merah muda)

Rf = 4,0 / 5,5
Rf = 0,727 (coklat)

Kode sampel S

Rf = 4,6 / 5,5
Rf = 0,836 (ungu)

Rf = 3,8 / 5,5
Rf = 0,690 (merah muda)

Kode sampel R

Rf = 4,8 / 5,5
Rf = 0,873 (orange)

Rf = 4,5 / 5,5
Rf = 0,818 (coklat)

Rf = 3,7 / 5,5
Rf = 0,627 (merah muda)

IV.2 Pembahasan

Pada percobaan ini dilakuakan pengidentifikasian kation dan anion dengan menggunakan kromatografi lapis tipis berdasarkan kecepatan partisi dan adsorbsi dari zat uji ke dalam eluen dengan parameter Rf dari noda yang terbentuk. Lempeng yang digunakan menggunakan adsorben yang terbuat dari silika gel.

Peralatan yang digunakan pada KLT ini meliputi suatu lempeng tipis. Dengan batuan alat ini bahan sorben dapat dibuat rata pada pelat dan dapat dilapiskan dengan ketebalan yang diinginkan. Pelat ini memungkinkan sejumlah larutan diperiksa dan larutan pembanding ditotolkan padab titik awal. Selain pelat juga digunakan bejana kromatografi dari bahan tembus cahaya dengan tutup rapat. Bejana dilapisi kertas saring dan sejumlah besar fase gerak dituangkan untuk penjenuhan kertas dan pada dasar bejana diisi dengan pelarut pengembang setinggi 1,5 ml. Ditutup dan dibiarkan jenuh dengan eluen.

Adsorben yang paling banyak digunakan dalam kromatografi lapis tipis adalah silika gel dan aluminium oksida. Silika gel umumnya mengandung bahan tambahan kalsium sulfat untuk mempertinggi daya lekatnya. Silika gel digunakan sebagai adsorben untuk kromatografi senyawa-senyawa netral, asam dan basa. Selain itu silika gel mempunyai efek pemisahan melalui proses adsorbsi dan partisi.

Larutan zat uji ditotolkan 2,5 cm dari bawah dan minimum 2 cm dari sisi pelat, sedemikian rupa sehingga terjadi noda teratur yang maksimum berdiameter 6 mm, tetapi pada percobaan ini syarat tersebut tidak diperhatikan sehingga lempeng yang digunakan lebernya sangat kecil. Penotol yang digunakan sebaiknya berdiameter 0,1 mm – 1 mm, sehingga larutan zat uji yang digunakan juga sesuai dengan apa yang diinginkan.

Setelah ditotolkan, pelat diuapkan. Lalu pelat diletakkanvertikal dalam bejana kromatografi dan titik awal harus tetap berada disebelah atas permukaan fase mobil. Bejana ditutup dan disimpan pada suhu 20 – 25 ^oC. Jika fase gerak sudah melewati trayek yang diberikan dalam monografi, pelat dikeluarkan dari bejana dan dikeringkan diudara. Cara pengembangan pada KLT adalah menaik.

Untuk KLT dapat digunakan metode identifikasi dengan menggunakan pereaksi kimia. Pereaksi yang sering digunakan asam sulfat pekat dalam bentuk yang disemprotkan. Akan terbentuk noda gelap senyawa yang dipisahkan karena terjadi pengarangan. Tetapi pada praktikum ini tidak digunakan pereaksi karena senyawa yang ingin dipisahkan sudah berwarna.

Harga Rf merupakan parameter karasteritik kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis. Harga ini merupakan ukuran kecepatan migrasi suatu senyawa pada kromatogram dan pada kondisi konstan merupakan besaran karasteristikdan reproduksibel. Harga Rf didefinisikan sebagai perbandingan antara jarak senyawa dari titik awal dan jarak tepi muka pelarut dari titik awal. Harga Rf dipengaruhi oleh faktor berikut :

• Pelarut yang digunakan
• Bahan pengemban (jenis dan ketebalan lapisan).
• Suhu.
• Kejenuhan ruangan akan pelarut.
• Kelembaban udara.
• Konsentrasi dan komposisi larutan yang diperiksa.
• Panjang trayek migrasi.
• Senyawa asing dan pencemaran pelarut.
• Ketidakhomogenan lempeng.

Berdasarkan faktor-faktor diatas, maka kesalahan dalam melakuakn peraktikum ini tetap mesti ada. Misalnya suhu udara padasaat praktikum dan kelembaban udara, karena pada saat praktikum diluar hujan. Selain itu Cuma digunakan satu jenis adsorben, sehingga pemisahan yang dilakukan kurang teliti karena harga Rf-nya dan warna bercak mungkin saja bisa sama.

BAB VI

PENUTUP

VI.1 Kesimpulan

Kesimpulan yang dapat ditarik dari percobaan ini adalah

No.	Kode sampel	Sampel yang digunakan
1. 2. 3. 4. 5.	I X Y S R	CaCl2 Semua zat Pb asetat NaCl ZnCl2

VI.2 Saran

Agar di dalam praktikum ini eluen yang digunakan berbagai jenis dan perbandingan serta lempeng yang digunakan mempunyai fase diam yang berbeda-beda misalnya alumin dan selulosa, sehingga hasil yang diinginkan lebih teliti.

DAFTAR PUSTAKA

1. Gritter, J.R., dkk., (1991), “ Kromatografi “, Penerbit Institut Teknologi Bandung, 1, 6, 8.
2. Ditjen POM., (1995), “ Farmakope Indonesia “, Edisi IV, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 45, 46, 50, 1002
3. Munson, J.R., (1991), “ Analisis Farmasi”, Bagian B, Airlangga University Press, Surabaya, 125, 128.
4. Ditjen POM., (1979), “ Farmakope Indonesia “, Edisi III, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, 41, 658, 151
5. Svehla, G., (1985), “ VOGEL : Buku Teks Analisis Kualitatif Makro dan Semimikro “, PT Kalman Media Pustaka, Jakarta.